ⅠNucleinsyreiintroduktion
Nukleinsyre er opdelt i deoxyribonukleinsyre (DNA) og ribonukleinsyre (RNA), hvoriblandt RNA er opdelt i ribosomalt RNA(rRNA), messenger-RNA(mRNA) og transfer-RNA(tRNA) i henhold til dets forskellige funktioner.DNA er hovedsageligt koncentreret i kernen, mitokondrier og chloroform, mens RNA hovedsageligt er fordelt i cytoplasmaet.Som det materielle grundlag for genekspression spiller nukleinsyreekstraktion en yderst vigtig rolle i molekylærbiologisk forskning og klinisk molekylær diagnose.Koncentrationen og renheden af nukleinsyreekstraktion vil direkte påvirke den efterfølgende PCR, sekventering, vektorkonstruktion, enzymfordøjelse og andre eksperimenter.
Ⅱ Nukleinsyreekstraktion og oprensningsmetode
① Phenol/chloroform-ekstraktionsmetode
Phenol/chloroform-ekstraktion er en klassisk metode til DNA-ekstraktion, som hovedsageligt anvender to forskellige organiske opløsningsmidler til at behandle prøverne, opløsning af DNA-baseret nukleinsyre i vandfasen, lipider i den organiske fase og proteiner mellem de to faser.Denne metode har fordelene ved lav pris, høj renhed og god effekt.Ulemperne er kompliceret betjening og lang tid.
② Trizol-metoden
Trizol-metoden er en klassisk metode til RNA-ekstraktion.Trizol-metoden opdeles i vandig fase og organisk fase efter centrifugering med chloroform, hvori RNA'et opløses i vandfasen, den vandige fase overføres til et nyt EP-rør, der opnås udfældning efter tilsætning af isopropanol, og derefter ethanoloprensning.Denne metode er velegnet til RNA-ekstraktion fra dyrevæv, celler og bakterier.
③ Centrifugalsøjleoprensningsmetode
Centrifugesøjleoprensningsmetoden kan adsorbere DNA specifikt gennem specielle siliciummatrixadsorptionsmaterialer, mens RNA og protein kan passere jævnt, og derefter bruge højt salt lavt pH til at kombinere nukleinsyre, lav salt høj pH værdi eluering for at adskille og oprense nukleinsyre.Fordelene er høj rensningskoncentration, høj stabilitet, intet behov for organisk opløsningsmiddel og lave omkostninger.Ulempen er, at det skal centrifugeres trin for trin, flere operationstrin.
④ Magnetiske perler metode
Den magnetiske perlemetode går ud på at splitte cellevævsprøven gennem lysatet, frigive nukleinsyren i prøven, og derefter adsorberes nukleinsyremolekylerne specifikt på overfladen af den magnetiske perle, mens urenheder såsom proteiner og sukker efterlades i væsken.Gennem trinene med cellevævsspaltning, magnetisk perlebinding med nukleinsyre, nukleinsyrevask, nukleinsyreeluering osv. opnås til sidst ren nukleinsyre.Fordelene er enkel betjening og kort tids brug uden behov for trincentrifugering.Det har lave tekniske krav og kan realisere automatisk og massedrift.Den specifikke kombination af magnetisk perle og nukleinsyre gør den ekstraherede nukleinsyre med høj koncentration og renhed.Ulempen er, at den nuværende markedspris er relativt dyr.
⑤ Andre metoder
Ud over de ovennævnte fire metoder er der kogende krakning, koncentreret saltmetode, anionisk detergentmetode, ultralydsmetode og enzymatisk metode osv.
Ⅲ Type af nukleinsyreekstraktion
Foregene har verdens førende Direct PCR-platform, dobbeltsøjlet RNA-isoleringsplatform (kun DNA + kun RNA).De vigtigste produkter omfatter DNA / RNA isolering kits, PCR og direkte PCR reagenser molekylære lab reagenser serie.
① Total RNA-ekstraktion
Total RNA ekstraktionsprøver omfatter blod, celler, dyrevæv, planter, vira osv. Høj renhed og høj koncentration af total RNA kan opnås gennem total RNA ekstraktion, som kan bruges i RT-PCR, chipanalyse, in vitro translation, molekylær kloning, Dot Blot og andre eksperimenter.
Foregene relateretRNA-isoleringssæt
Animal Total RNA Isolation Kit--Hurtigt og effektivt ekstraherer total-RNA af høj renhed og høj kvalitet fra forskellige dyrevæv.
Cell Total RNA Isolation Kit--Højt oprenset og højkvalitets total-RNA kan opnås fra forskellige dyrkede celler på 11 minutter.
Plant Total RNA Isolation Kit--Ekstraher hurtigt total-RNA af høj kvalitet fra planteprøver med lavt indhold af polysaccharider og polyphenoler.
Viralt RNA-isoleringssæt--Isoler og oprens hurtigt viralt RNA fra prøver såsom plasma, serum, cellefri kropsvæsker og cellekultursupernatanter.
② Genomisk DNA-ekstraktion
Genomisk DNA-ekstraktionsprøver omfatter jord, fæces, blod, celler, dyrevæv, planter, vira osv. Genomisk DNA-ekstraktion kan bruges til enzymfordøjelse, DNA-bibliotekskonstruktion, PCR, antistofpræparation, Western blot hybridiseringsanalyse, genchip, høj -throughput sekventering og andre eksperimenter.
Foregene relateretDNA-isoleringssæt
Animal Tissue DNA Isolation Kit--Hurtig ekstraktion og oprensning af genomisk DNA fra flere kilder, såsom dyrevæv, celler osv.
Blod DNA Midi Kit (1-5 ml)--Oprens hurtigt genomisk DNA af høj kvalitet fra antikoaguleret blod (1-5 ml).
Bukal podning/FTA-kort DNA-isoleringssæt--Oprens hurtigt genomisk DNA af høj kvalitet fra prøver af mundvab/FTA-kort.
Plante-DNA-isoleringssæt-- Hurtigt rense og opnå genomisk DNA af høj kvalitet fra planteprøver (herunder polysaccharider og polyphenol planteprøver)
③ Plasmidekstraktion
Plasmid er en slags cirkulært lille molekyle-DNA i celler, som er en almindelig bærer for DNA-rekombination.Metoden til plasmidekstraktion er at fjerne RNA, adskille plasmid fra bakterielt genomisk DNA og fjerne protein og andre urenheder for at opnå relativt rent plasmid.
Generelt Plasmid Mini Kit- Hurtigt rense plasmid-DNA af høj kvalitet fra transformerede bakterier til rutinemæssige molekylærbiologiske eksperimenter såsom transformation og enzymfordøjelse
④ Andre ekstraktionstyper, miRNA-ekstraktion osv.
Animal miRNA Isolation Kit--Hurtigt og effektivt ekstraheres små RNA-fragmenter af 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA fra forskellige dyrevæv og celler
Ⅳ Krav til nukleinsyreekstraktion og oprensning resulterers
① For at sikre integriteten af den primære struktur af nukleinsyre.
② Reducer interferensen af proteiner, sukkerarter, lipider og andre makromolekyler
③ Der bør ikke være noget organisk opløsningsmiddel eller høj koncentration af metalioner, der kan hæmme enzymet i nukleinsyreprøver.
④ RNA og anden nukleinsyrekontamination bør elimineres ved ekstrahering af DNA og omvendt.
Indlægstid: 24. november 2022
